Šķidruma hromatogrāfijas kvantitatīvās analīzes principi un metodes

Šķidruma hromatogrāfijas atdalīšanas mehānisms ir balstīts uz atšķirību maisījumā esošo komponentu afinitātē pret abām fāzēm.

Atbilstoši dažādām stacionārajām fāzēm šķidruma hromatogrāfiju iedala šķidruma-cietvielu hromatogrāfijā, šķidruma-šķidruma hromatogrāfijā un saistītās fāzes hromatogrāfijā.Visplašāk tiek izmantota šķidruma-cietvielu hromatogrāfija ar silikagelu kā pildvielu un saistītās fāzes hromatogrāfija ar mikrosilīcija dioksīdu kā matricu.

Pēc stacionārās fāzes formas šķidruma hromatogrāfiju var iedalīt kolonnu hromatogrāfijā, papīra hromatogrāfijā un plānslāņa hromatogrāfijā.Pēc adsorbcijas spējas to var iedalīt adsorbcijas hromatogrāfijā, sadalīšanas hromatogrāfijā, jonu apmaiņas hromatogrāfijā un gēla caurlaidības hromatogrāfijā.

Pēdējos gados šķidruma kolonnas hromatogrāfijas sistēmai ir pievienota augstspiediena šķidruma plūsmas sistēma, lai kustīgā fāze strauji plūst zem augsta spiediena, lai uzlabotu atdalīšanas efektu, tādējādi nodrošinot augstas efektivitātes (pazīstama arī kā augstspiediena) šķidruma hromatogrāfija. ir parādījies.

DAĻA
01 Šķidruma hromatogrāfijas kvantitatīvās analīzes princips

Lai kvantitatīvi noteiktu, pamatojoties uz kvalitatīviem rādītājiem, kā standarti ir vajadzīgas tīras vielas;

Šķidruma hromatogrāfijas kvantitatīva noteikšana ir relatīvi kvantitatīvā metode: tas ir, analizējamās vielas daudzumu maisījumā nosaka no zināma tīra standartparauga daudzuma.

DAĻA
02 Pamats kvantitatīvai noteikšanai ar šķidruma hromatogrāfiju

Izmērītā komponenta (W) daudzums ir proporcionāls atbildes vērtībai (A) (pīķa augstums vai pīķa laukums), W=f×A.

Kvantitatīvās korekcijas koeficients (f): tā ir kvantitatīvās aprēķina formulas proporcionalitātes konstante, un tās fiziskā nozīme ir izmērītās komponentes daudzums, ko attēlo vienības reakcijas vērtība (pīķa laukums).

Kvantitatīvo korekcijas koeficientu var iegūt no zināmā standarta parauga daudzuma un tā atbildes vērtības.

Izmēriet nezināmā komponenta atbildes vērtību, un komponenta daudzumu var iegūt ar kvantitatīvās korekcijas koeficientu.

DAĻA
03 Kvantitatīvās analīzes vispārīgie termini

Paraugs (paraugs): šķīdums, kas satur analītu hromatogrāfiskai analīzei.Sadalīts standarta un nezināmos paraugos.

Standarts: tīrs produkts ar zināmu koncentrāciju.Nezināms paraugs (nezināms): maisījums, kura koncentrācija ir jāpārbauda.

Parauga svars: pārbaudāmā parauga sākotnējais svērums.

Atšķaidījums: nezināma parauga atšķaidīšanas koeficients.

Komponents: kvantitatīvi analizējamā hromatogrāfiskā pīķa, tas ir, analizējamā viela, kuras saturs nav zināms.

Komponenta daudzums (daudzums): pārbaudāmās vielas saturs (vai koncentrācija).

Veselība: skaitļošanas process hromatogrāfiskās pīķa pīķa laukuma mērīšanai ar datoru.

Kalibrēšanas līkne: komponenta satura un atbildes vērtības lineāra līkne, kas noteikta no zināma standartvielas daudzuma, ko izmanto, lai noteiktu nezināmo analizējamās vielas saturu.

DAĻA
04 Šķidruma hromatogrāfijas kvantitatīvā analīze

1. Izvēlieties hromatogrāfijas metodi, kas piemērota kvantitatīvai analīzei:

l Apstipriniet konstatētā komponenta maksimumu un sasniedziet izšķirtspēju (R), kas ir lielāka par 1,5

l Nosaka pārbaudīto komponentu hromatogrāfisko pīķu konsistenci (tīrību).

l Noteikt metodes noteikšanas robežu un kvantitatīvās noteikšanas robežu;jutība un lineārais diapazons

2. Izveidojiet kalibrēšanas līkni ar dažādu koncentrāciju standarta paraugiem

3. Pārbaudiet kvantitatīvo metožu precizitāti un precizitāti

4. Izmantojiet atbilstošo hromatogrāfijas pārvaldības programmatūru, lai ieviestu paraugu ņemšanu, datu apstrādi un ziņojumu rezultātus

DAĻA
05 Kvantitatīvo maksimumu identifikācija (kvalitatīva)

Kvalitatīvi identificējiet katru kvantitatīvi nosakāmo hromatogrāfisko maksimumu

Vispirms izmantojiet standarta paraugu, lai noteiktu kvantitatīvi nosakāmās hromatogrāfiskās pīķa aiztures laiku (Rt).Salīdzinot aiztures laiku, atrodiet komponentu, kas atbilst katram nezināmā parauga hromatogrāfiskajam maksimumam.Hromatogrāfiskā kvalitatīvā metode ir aiztures laika salīdzināšana ar standarta paraugu.Kritērijs Nepietiekamspapildu apstiprinājums (kvalitatīvs)

1. Standarta pievienošanas metode

2. Vienlaikus izmantot citas metodes: citas hromatogrāfijas metodes (mainīt mehānismu, piemēram: izmantojot dažādas hromatogrāfijas kolonnas), citus detektorus (PDA: spektra salīdzināšana, spektra bibliotēkas meklēšana; MS: masas spektra analīze, spektra bibliotēkas meklēšana)

3. Citi instrumenti un metodes

DAĻA
06 Kvantitatīvās maksimālās konsekvences apstiprināšana

Apstiprināt hromatogrāfiskās pīķa konsistenci (tīrību)

Pārliecinieties, ka zem katras hromatogrāfiskās pīķa ir tikai viens izmērītais komponents

Pārbaudiet, vai netiek traucētas līdzeluējušās vielas (piemaisījumi)

Hromatogrāfiskās pīķa konsistences (tīrības) apstiprināšanas metodes

Spektrogrammu salīdzināšana ar fotodiodes matricas (PDA) detektoriem

Maksimālās tīrības identifikācija

2996 Tīrības leņķa teorija

Kvantitatīvās metodes, ko parasti izmanto 07. DAĻĀ

Standarta līknes metode, kas sadalīta ārējā standarta metodē un iekšējā standarta metodē:

1. Ārējā standarta metode: visbiežāk izmanto šķidrumu hromatogrāfijā

Tika sagatavota zināmu koncentrāciju standarta paraugu sērija, izmantojot tīrus testējamo savienojumu paraugus kā standarta paraugus.ievada kolonnā līdz tās reakcijas vērtībai (pīķa laukumam).
Noteiktā diapazonā starp standarta parauga koncentrāciju un reakcijas vērtību ir laba lineāra sakarība, proti, W= f×A , un tiek izveidota standarta līkne.

Tieši tādos pašos eksperimenta apstākļos injicējiet nezināmo paraugu, lai iegūtu mērāmā komponenta atbildes vērtību.Pēc zināmā koeficienta f var iegūt mērāmās sastāvdaļas koncentrāciju.

Ārējā standarta metodes priekšrocības:vienkārša darbība un aprēķins, tā ir plaši izmantota kvantitatīvā metode;nav nepieciešams noteikt un eluēt katru sastāvdaļu;nepieciešams standarta paraugs;standarta parauga un nezināmā parauga mērījumu apstākļiem jābūt konsekventiem;injekcijas tilpumam jābūt precīzam.

Ārējās standarta metodes trūkumi:Eksperimenta apstākļiem ir jābūt augsti, piemēram, detektora jutība, plūsmas ātrums un kustīgās fāzes sastāvs nevar tikt mainīts;katras injekcijas tilpumam jābūt ar labu atkārtojamību.

2. Iekšējā standarta metode: precīzs, bet apgrūtinošs, visbiežāk izmanto standarta metodēs

Zināmu daudzumu iekšējā standarta pievieno standartam, lai izveidotu jauktu standartu, un tiek sagatavota zināmas koncentrācijas darba standartu sērija.Standarta molārā attiecība pret iekšējo standartu jauktajā standartā paliek nemainīga.Ievadiet hromatogrāfijas kolonnā un par atbildes vērtību ņemiet (standarta parauga pīķa laukums/iekšējais standarta parauga pīķa laukums).Atbilstoši lineārajai sakarībai starp reakcijas vērtību un darba standarta koncentrāciju, proti, W= f×A , tiek veidota standarta līkne.

Zināmu daudzumu iekšējā standarta pievieno nezināmajam paraugam un ievada kolonnā, lai iegūtu mērāmā komponenta atbildes vērtību.Pēc zināmā koeficienta f var iegūt mērāmās sastāvdaļas koncentrāciju.

Iekšējā standarta metodes īpašības:Darbības laikā paraugs un iekšējais standarts tiek sajaukti kopā un ievadīti hromatogrāfijas kolonnā, kamēr izmērītā komponenta daudzuma attiecība pret iekšējo standartu sajauktajā šķīdumā ir nemainīga, parauga tilpums mainās. neietekmēs kvantitatīvos rezultātus..Iekšējā standarta metode kompensē parauga tilpuma un pat mobilās fāzes un detektora ietekmi, tāpēc tā ir precīzāka nekā ārējā standarta metode.

DAĻA
08 Faktori, kas ietekmē kvantitatīvās analīzes rezultātus

Sliktu precizitāti var izraisīt:

Nepareiza pīķa laukuma integrācija, parauga sadalīšanās vai piemaisījumi, kas ievadīti parauga sagatavošanas laikā, parauga flakons nav noslēgts, parauga vai šķīdinātāja iztvaikošana, nepareiza parauga sagatavošana, parauga injekcijas problēmas, nepareiza iekšējā standarta sagatavošana

Iespējamie sliktas precizitātes iemesli:

Nepareiza pīķa integrācija, injekcijas vai inžektora problēmas, parauga sadalīšanās vai piemaisījumi, kas ievadīti parauga sagatavošanas laikā, hromatogrāfijas problēmas, pasliktināta detektora reakcija