Mobilā fāze ir līdzvērtīga asiņu šķidrajai fāzei, un lietošanas laikā ir jāpievērš uzmanība dažādām lietām. Starp tiem ir dažas "slazdas", kurām jāpievērš uzmanība.
01. Pēc organiskā šķīdinātāja pievienošanas izmēra kustīgās fāzes pH
Ja mērīsit pH ar organisko piedevu, iegūtais pH būs savādāks nekā pirms organiskā šķīdinātāja pievienošanas. Tomēr vissvarīgākais ir būt konsekventam. Ja vienmēr mērāt pH pēc organiskā šķīdinātāja pievienošanas, noteikti norādiet savas darbības izmantotajā metodē, lai citi izmantotu to pašu metodi. Šī metode nav 100% precīza, taču tā vismaz saglabās metodes konsekvenci. Tas var būt svarīgāk, nekā iegūt precīzu pH vērtību.
02. Buferis netiek izmantots
Bufera mērķis ir kontrolēt pH un novērst tā izmaiņas. Daudzas citas metodes maina mobilās fāzes pH, kas var izraisīt aiztures laika, pīķa formas un maksimālās reakcijas izmaiņas.
Skudrskābe, TFA utt. nav buferi
03. Neizmantojot buferi normālā pH diapazonā
Katram buferim ir 2 pH vienību diapazona platums, kurā tas nodrošina vislabāko pH stabilitāti. Buferi ārpus šī loga nenodrošinās efektīvu pretestību pH izmaiņām. Izmantojiet buferi pareizajā diapazonā vai izvēlieties buferi, kas aptver nepieciešamo pH diapazonu.
04. Pievienojiet buferšķīdumu organiskajam šķīdumam
Buferšķīduma sajaukšana ar organisko fāzi, visticamāk, izraisīs buferšķīduma nogulsnēšanos. Daudzos gadījumos, pat ja ir bijuši nokrišņi, tos joprojām ir grūti noteikt. Atcerieties vienmēr pievienot organisko šķīdumu ūdens fāzei, kas var ievērojami samazināt bufera nokrišņu iespējamību.
05. Sajauc koncentrācijas gradientu no 0% ar sūkni
Mūsdienās pieejamie sūkņi var efektīvi sajaukt pārvietojamās fāzes un gāzēt, taču ne visiem, kas izmanto jūsu metodi, būs augstas kvalitātes sūknis. Sajauciet A un B vienā šķīdumā un palaidiet to 100% vienā šķīdumā.
Piemēram, 950 ml organiskā sākuma maisījuma var pagatavot, sajaucot ar 50 ml ūdens. Tā priekšrocība ir tāda, ka tas var samazināt HPLC atšķirības un samazināt burbuļu un nokrišņu iespējamību sistēmā. Vērts atzīmēt, ka sūkņa maisījuma attiecība ir 95:5, kas nenozīmē, ka iepriekš sajauktā aiztures laiks pudelē ir arī 95:5.
06. Bufera maiņai netiek izmantota pareizā modificētā skābe (bāze).
Izmantojiet tikai to skābi vai bāzi, kas veido izmantoto bufersāli. Piemēram, nātrija fosfāta buferšķīdums jāsagatavo tikai ar fosforskābi vai nātrija hidroksīdu.
07. Metodē nav norādīta visa informācija par buferi, piemēram, pievienojot 5gnātrija fosfāts uz 1000 ml ūdens.
Bufera veids nosaka pH diapazonu, ko var buferēt. Nepieciešamā koncentrācija nosaka bufera stiprumu. 5 gramiem vai bezūdens nātrija fosfāta un 5 gramiem mononātrija fosfāta monohidrāta ir dažādas bufera stipruma.
08. Organisko šķīdinātāju pievienošana pirms pārbaudes
Ja iepriekšējā metodē tika izmantots buferšķīdums bāzes līnijai B un jūsu metodē tiek izmantots organiskais šķīdums bāzes līnijai B, jūs, cerams, varat nogulsnēt buferšķīdumu sūkņa caurulītē un sūkņa galvā.
09. Paceliet pudeli un iztukšojiet pēdējo pilienu
Pastāv liela iespēja, ka jums nebūs pietiekami daudz mobilās fāzes, lai pabeigtu visu skrējienu, un jūsu paraugs smēķēs. Papildus sūkņa sistēmas un kolonnas izdegšanas iespējai mobilā fāze pilnībā iztvaiko un mainīsies mobilā fāze pudeles augšpusē.
10. Izmantojiet ultraskaņas degazēšanas mobilo fāzi
Vissvarīgākais ir pārliecināties, ka visi bufera sāļi ir izšķīdināti, taču tas ir vissliktākais degazēšanas veids un ātri uzsildīs kustīgo fāzi, izraisot organisko komponentu iztvaikošanu. Lai vēlāk izvairītos no nevajadzīgām problēmām, veltiet piecas minūtes mobilās fāzes vakuumfiltrēšanai.
Publicēšanas laiks: 27. augusts 2024